BspQI
BspQI rekombinant şəkildə E. coli-də ifadə oluna bilər ki, bu da xüsusi saytları tanıya bilir və altında istehsal olunur.
BspQI, IIs məhdudlaşdırıcı endonükleaz məhdudlaşdırıcı endonükleaz, Bacillus sphaericus-dan klonlanmış və dəyişdirilmiş BspQI genini daşıyan rekombinant E. coli ştamından əldə edilmişdir.O, xüsusi saytları tanıya bilər və tanınma ardıcıllığı və parçalanma yerləri aşağıdakılardır:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Məhsul Xüsusiyyətləri
1. Yüksək aktivlik, Tez həzm;
2. “Skalpel” kimi dəqiq kəsməni təmin edən aşağı ulduz aktivliyi;
3. BSA və heyvan mənşəli olmadan;
Metilləşmə həssaslığı
Dmetilasiya:Həssas deyil;
Dsm metilasiya:Həssas deyil;
CpG metilasiyası:Həssas deyil;
Saxlama şəraiti
Məhsul ≤ 0℃ göndərilməlidir;-25~-15 ℃ şəraitdə saxlayın.
Saxlama buferi
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Rekombinant Albumin, 0.1% Trition X- 100 və 50% qliserol (pH 7.0 @2).
Vahid Tərifi
Bir vahid ümumi reaksiya həcmi 50 µL olan 50°C-də 1 µg Daxili nəzarət DNT-ni 1 saat ərzində həzm etmək üçün tələb olunan fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.
Keyfiyyətə nəzarət
Protein Saflığının Təhlili (SDS-PAGE):BspQI-nin təmizliyi SDS-PAGE analizi ilə ≥95% müəyyən edilmişdir.
RNaz:50 ℃ temperaturda 4 saat ərzində 1,6 μg MS2 RNT ilə 10U BspQI agaroz gel elektroforezi ilə müəyyən edildiyi kimi heç bir deqradasiya vermir.
Qeyri-spesifik DNaz Fəaliyyəti:10U BspQI ilə 1μg λ DNT ilə 16 saat ərzində 50°C temperaturda, 1 saat ərzində 50°C ilə müqayisədə, agaroz gel elektroforezi ilə müəyyən edildiyi kimi artıq DNT vermir.
Bağlama və yenidən kəsmə:1 μg λDNT 10U BspQI ilə həzm edildikdən sonra DNT fraqmentləri 16ºC-də T4 DNT liqaza ilə bağlana bilər.Və bu bağlanmış fraqmentlər BspQI ilə yenidən kəsilə bilər.
E. coli DNT: E. coli 16s rDNT spesifik TaqMan qPCR aşkarlanması E.coli genom qalığının ≤ 0.1pg/ul olduğunu göstərdi.
Host protein qalığı:≤ 50 ppm
Bakterial Endotoksin: LAL-test, Çin Farmakopeyası IV 2020 nəşrinə görə, gel limiti test üsulu, ümumi qayda (1143).Bakterial endotoksin miqdarı ≤10 AB/mq olmalıdır.
Reaksiya sistemi və şərtləri
| Komponent | Həcmi |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNT | 1 μg |
| 10 x BspQ I Bufer | 5 μL |
| dd H2O | 50 μL-ə qədər |
Reaksiya şərtləri: 50 ℃, 1~16 saat.
İstilik inaktivasiyası: 20 dəqiqə ərzində 80°C.
Tövsiyə olunan reaksiya sistemi və şərtləri nisbətən yaxşı ferment həzm təsiri təmin edə bilər, bu yalnız istinad üçündür, təfərrüatlar üçün eksperimental nəticələrə baxın.
Məhsul tətbiqi
Endonükleaz həzminin məhdudlaşdırılması, Sürətli klonlaşdırma.
Qeydlər
1. Fermentin həcmi reaksiyanın həcminin ≤ 1/10 hissəsidir.
2. Ulduz aktivliyi qliserin konsentrasiyası 5%-dən çox olduqda baş verə bilər.
3. Substrat tövsiyə olunan nisbətdən aşağı olduqda parçalanma aktivliyi baş verə bilər.
