DNaz I
DNaz I (Dezoksiribonukleaza I) tək və ya cüt zəncirli DNT-ni həzm edə bilən endodeoksiribonukleazdır.O, 5′-terminalda fosfat qrupları və 3′-terminalda hidroksil ilə monodeoksinukleotidlər və ya tək və ya ikiqat zəncirli oliqodeoksinukleotidlər istehsal etmək üçün fosfodiester bağlarını tanıyır və parçalayır.DNaz I-in aktivliyi Ca2+-dan asılıdır və Mn2+ və Zn2+ kimi ikivalentli metal ionları tərəfindən aktivləşdirilə bilər.5mM Ca2+ fermenti hidrolizdən qoruyur.Mg2+ varlığında ferment təsadüfi olaraq DNT-nin hər hansı zəncirindəki istənilən yeri tanıya və parçalaya bilərdi.Mn2+ varlığında, DNT-nin qoşa zəncirləri eyni vaxtda tanınır və 1-2 nukleotid çıxıntılı düz uçlu DNT fraqmentləri və ya yapışqan uçlu DNT fraqmentləri yaratmaq üçün demək olar ki, eyni yerdə parçalana bilər.
Məhsul Mülkiyyəti
Bovine Pankreas DNase I maya ifadə sistemində ifadə edildi və təmizləndi.
Copponentlər
| Komponent | Həcmi | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNaz I, RNazsız | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Bufer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5×10 ml |
Nəqliyyat və Saxlama
1. Saxlama Sabitliyi: – Saxlama üçün 15℃~-25℃;
2.Nəqliyyat Sabitliyi: Buz paketləri altında daşınma;
3. Təchizat: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% qliserin, 25 ° C-də pH 7.6.
Vahid Tərifi
Bir vahid 37°C-də 10 dəqiqə ərzində 1 µg pBR322 DNT-ni tamamilə parçalayan fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.
Keyfiyyətə nəzarət
RNaz:37 ℃ temperaturda 4 saat ərzində 1,6 μg MS2 RNT ilə 5U DNase I, agaroz gel elektroforezi ilə müəyyən edildiyi kimi heç bir deqradasiya vermir.
Bakterial Endotoksin:LAL-test, Çin Farmakopeyası IV 2020 nəşrinə görə, gel limiti test üsulu, ümumi qayda (1143).Bakterial endotoksin miqdarı ≤10 AB/mq olmalıdır.
İstifadəyə dair təlimatlar
1. Aşağıdakı nisbətlərə uyğun olaraq RNazsız boruda reaksiya məhlulunu hazırlayın:
| Komponent | Həcmi |
| RNT | X μg |
| 10 × DNase I Bufer | 1 μL |
| DNaz I, RNazsız (5U/μL) | mq RNT üçün 1 U |
| gg2O | 10 μL-ə qədər |
15 dəqiqə ərzində 2,37 ℃;
3. Reaksiyanı dayandırmaq üçün dayandırma buferini əlavə edin və DNase I-i təsirsiz hala gətirmək üçün 10 dəqiqə ərzində 65 ℃ temperaturda qızdırın. Nümunə növbəti transkripsiya təcrübəsi üçün birbaşa istifadə edilə bilər.
Qeydlər
1.Hər μg RNT üçün 1U DNase I və ya 1μg RNT-dən az üçün 1U DNase I istifadə edin.
2. EDTA fermentin inaktivasiyası zamanı RNT-ni parçalanmaqdan qorumaq üçün 5 mM yekun konsentrasiyaya əlavə edilməlidir.
