Ultra nukleaz
UltraNuclease gen mühəndisliyi ilə yaradılmış Serratia marcescens-dən əldə edilən, DNT və ya RNT-ni ikiqat və ya tək zəncirli, xətti və ya dairəvi şəkildə parçalamağa qadir olan, nuklein turşularını tam olaraq 5'-monofosfat oliqonukleotidlərə və uzunluqlu 5'-monofosfat oliqonukleotidlərə parçalamağa qadirdir. .Genetik mühəndislik modifikasiyasından sonra məhsul Escherichia coli-də (E. coli) fermentləşdirilmiş, ifadə edilmiş və təmizlənmişdir ki, bu da hüceyrə supernatantının və hüceyrə lizatının viskozitesini azaldır, eyni zamanda zülalın təmizlənmə səmərəliliyini və funksional tədqiqatını yaxşılaşdırır.O, həmçinin gen terapiyası, virusların təmizlənməsi, peyvənd istehsalında, zülal və polisaxarid əczaçılıq sənayesində ev sahibi qalıq nuklein turşusunu çıxaran reagent kimi istifadə edilə bilər.
Məhsul xüsusiyyətləri
| CAS nömrəsi | 9025-65-4 |
| EC nömrəsi | |
| Molekulyar çəki | 30kDa |
| İzoelektrik nöqtə | 6.85 |
| Protein Saflığı | ≥99%（ SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Xüsusi Fəaliyyət | ≥1.1×106U/mq |
| Optimum Temperatur | 37°C |
| Optimal pH | 8.0 |
| Proteaz Fəaliyyəti | mənfi |
| Bioyük | ＜10CFU/100,000U |
| Qalıq Host-hüceyrə Proteini | ≤10ppm |
| Ağır Metal | ≤10ppm |
| Bakterial endotoksin | ＜0,25EU/1000U |
| Saxlama Buferi | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2 ， 20mM NaCl, 50% qliserin |
Saxlama şəraiti
≤0°C daşıma；-25~-15°C Saxlama，2 il etibarlılıq (dondurma-ərimədən qaçın).
Vahid Tərifi
37 °C-də 30 dəqiqə ərzində △A260-ın udulma dəyərini 1,0 dəyişdirmək üçün istifadə olunan fermentin miqdarı, oliqonukleotidlərə kəsilərək həzm olunmuş 37μg qızılbalıq sperma DNT-sinə bərabər olan pH 8.0 aktiv vahid (U) kimi müəyyən edilmişdir.
Keyfiyyətə nəzarət
Qalıq Host-hüceyrə Proteini: ELISA dəsti
•Proteaz Qalıqlar: 250KU/mL UltraNuclease substrat ilə 60 dəqiqə reaksiya verdi, heç bir fəaliyyət aşkar edilmədi.
•Bakterial endotoksin: LAL-Test, Çin Xalq Respublikasının Farmakopeyası Cild 4 (2020 Buraxılış) gel limiti test üsulu.Ümumi Qaydalar (1143).
•Bioyük: Çin Xalq Respublikasının Farmakopeyası Cild 4 (2020-ci il nəşri) - Ümumi
Sterillik Testi Qaydaları (1101), ÇXR Milli Standartı, GB 4789.2-2016.
•Ağır metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Əməliyyat
SDS konsentrasiyası 0,1% və ya EDTA-dan çox olduqda UltraNuclease fəaliyyəti əhəmiyyətli dərəcədə inhibə edilmişdir
konsentrasiyası 1 mM-dən çox idi. Səthi aktiv maddə Triton X- 100, Tween 20 və Tween 80 nukleaza heç bir təsir göstərməmişdir.
konsentrasiyası 1,5%-dən az olduqda xassələri.
| Əməliyyat | Optimal Əməliyyat | Etibarlı Əməliyyat |
| Temperatur | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mm | 1-15 mm |
| DTT | 0-100 mM | >100 mm |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mM | >100 mm |
| Monovalent metal ionu (Na+, K+ və s.) | 0-20 mM | 0-200mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
İstifadəsi və dozası
• Peyvənd məhsullarından ekzogen nuklein turşusunu çıxarın, qalıq nuklein turşusunun toksikliyi riskini azaldın və məhsulun təhlükəsizliyini yaxşılaşdırın.
• Nuklein turşusunun yaratdığı yem mayesinin özlülüyünü azaldın, emal müddətini qısaldın və zülal məhsuldarlığını artırın.
• Münasib olan zərrəcikləri (virus, daxilolma gövdəsi və s.) bükmüş nuklein turşusunu çıxarın.
hissəciklərin sərbəst buraxılması və təmizlənməsi üçün.
| Eksperimental Növ | Protein istehsalı | Virus, Peyvənd | Hüceyrə dərmanları |
| Hüceyrələrin sayı | 1 g hüceyrə yaş çəkisi (10 ml tamponla yenidən dayandırılır) | 1 l fermentasiya maye supernatant | 1 l mədəniyyət |
| Minimum doza | 250U | 100U | 100U |
| Tövsiyə olunan doza | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nukleaz müalicəsi sütun xromatoqrafiyası, elektroforez və ləkələmə analizi üçün nümunənin həllini və bərpasını yaxşılaşdıra bilər.
• Gen terapiyasında nuklein turşusu təmizlənmiş adeno ilə əlaqəli virusları əldə etmək üçün çıxarılır.
