2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Pişik nömrəsi: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) DNT ekstraktı və ya nümunə hazırlamadan birbaşa nümunələrdən PCR həyata keçirmək üçün nəzərdə tutulmuşdur.Bu reagent isti başlanğıc DNT polimeraza, urasil DNT qlikosilaz (UNG), RNaz inhibitoru, MgCl-dən ibarətdir.2, kəmiyyət PCR (qPCR) üçün dNTP-lər (dTTP əvəzinə dUTP ilə) və stabilizatorlar.Bu reagent yüksək inhibitor tolerantlığını formalaşdırır və beləliklə, DNT ekstraktı olmadan boğaz tamponu, tüpürcək, anti-laxtalanmış tam qan, plazma və serum kimi nümunələrin aşkarlanmasına birbaşa tətbiq oluna bilər.Reagent anti-inhibitor DNT polimeraza və UNG fermentinin qarışıq fermentləri ilə qPCR üçün xüsusi tampondan istifadə edir.Buna görə də, o, inhibitorları olan nümunələrdə hədəf genlərin yaxşı gücləndirilməsini əldə edə və PCR qalıqları və aerozol çirklənməsinin səbəb olduğu yanlış müsbət gücləndirilməsini maneə törədə bilər.Bu reagent Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche və s. kimi əksər floresan kəmiyyət PCR alətləri ilə uyğun gəlir.
Komponentlər
1. 50×SensiDirect Enzim/UNG Qarışığı
2. 2×SensiDirect Premix Bufer (dUTP)
Saxlama şəraiti
Bütün komponentlər uzunmüddətli saxlama üçün -20 ℃ və 3 aya qədər 4 ℃ temperaturda saxlanılmalıdır.Əridikdən sonra yaxşıca qarışdırın və istifadə etməzdən əvvəl sentrifuqa edin.Tez-tez donma-ərimədən çəkinin.
Velosiped Protokolu
| addım | Temperatur | Vaxt | Velosiped |
| Həzm | 50℃ | 2dəq | 1 |
| Polimerazın aktivləşdirilməsi | 95℃ | 1-5 dəq | 1 |
| Denatura | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| Qızartma/uzatma | 56-64℃ | 20-60-lar |
Pipetləmə Təlimatları
| Reagent | Həcmi başına reaksiya | Reaksiya başına həcm | Son Konsentrasiya |
| 2×SensiDirect Premix Bufer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzim/UNG Qarışığı | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Prob Qarışığı1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Nümunə3, 4 | - | - | - |
| gg2O | - | - | - |
| Ümumi həcm | 25 μL | 50 μL | - |
1. Astarın son konsentrasiyası adətən 0,2μM-dir.Daha yaxşı nəticələr üçün primer konsentrasiyası 0,2-1μM aralığında optimallaşdırıla bilər.
2. Ümumiyyətlə, zond konsentrasiyası 0,1-0,3μM aralığında optimallaşdırıla bilər.Zondun optimal konsentrasiyası real vaxtda PCR gücləndirmə aləti, zond növü və flüoresan etiketləmə maddəsinin növü ilə bağlıdır.Lütfən, alət təlimatına və ya hər bir flüoresan zondun xüsusi tələblərinə baxın.
3. Nümunələrin müxtəlif növləri müxtəlif növ və məzmunu inhibitor və hədəf genin surət sayını ehtiva edir.Nümunə həcmi faktiki vəziyyətlə nəzərə alınmalıdır.Lazım gələrsə, nukleazsız su və ya TE tamponu əlavə etməklə nümunənin seyreltilməsini edin.
4. Müxtəlif nümunələrin tövsiyə olunan həcmi:
| Nümunə | Həcmi bir 50 μL reaksiya | Maksimum nisbət |
| Antikoaqulyasiya edilmiş tam qan | 2,5 μL | 5% |
| Plazma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Boğaz çubuq | 10 μL | 20% |
| tüpürcək | 10 μL | 20% |
Keyfiyyətə nəzarət
1. Funksiya aşkarlanması: qPCR-nin həssaslığı, spesifikliyi və təkrarlanması.
2. Ekzogen nukleaz aktivliyi yoxdur: ekzogen endonükleaz və ekzonükleaz çirklənməsi yoxdur.
Məhsulun Qeydləri
1. Bu məhsul 1-5 dəqiqə ərzində aktivləşdirilə bilən yeni növ isti başlanğıc DNT polimerazından istifadə edir. Onun reaksiya tamponu optimallaşdırıldığı üçün, zond metodundan istifadə etməklə ikiqat və ya çoxlu flüoresan kəmiyyət PCR üçün daha uyğundur.
2. Əgər PCR gücləndirilməsinin Rn dəyəri çox aşağıdırsa və ya gücləndirmə açıq şəkildə maneə törədirsə, nümunənin miqdarının azaldılması, reaksiya həcminin artırılması və ya nümunənin əvvəlki seyreltilməsi nəticələri yaxşılaşdıra bilər.
3. Qan, tüpürcək, sidik, boğaz tamponu və s. toplanması klinik meyar tələblərinə uyğun olmalıdır və nuklein turşusunun deqradasiyasının qarşısını almaq üçün təzə nümunədən istifadə edilə bilər.
4. Fərqli amplikonların dUTP-dən istifadə səmərəliliyi və UNG-yə həssaslığı fərqli olduğundan, UNG sistemindən istifadə edərkən aşkarlama həssaslığı azalarsa, reagentlər optimallaşdırılmalıdır.Zəhmət olmasa, texniki dəstək üçün bizimlə əlaqə saxlayın.
5. Bir mərhələli reaksiyalar arasında ötürülən PCR məhsullarının gücləndirilməsinin qarşısını almaq üçün gücləndirmə üçün xüsusi eksperimental sahə və pipet tələb olunur.Əlcəklərlə işləyin və tez-tez dəyişdirin və PCR gücləndirilməsindən sonra reaksiya borusunu açmayın.
