Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Pişik nömrəsi: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) şablon kimi RNT-yə əsaslanan multipleks kəmiyyət PCR dəstidir.Təcrübə prosesində əks transkripsiya və kəmiyyət PCR eyni boruda aparıldı ki, bu da eksperimental əməliyyatı sadələşdirdi və çirklənmə riskini azaltdı.Bu dəstdə ilk zəncir cDNA istiliyədavamlı Əks Transkriptaza ilə effektiv şəkildə sintez edilmiş və HotStart Tag DNT Polimeraz tərəfindən kəmiyyətcə gücləndirilmişdir.Kitdə əsasən optimallaşdırılmış MP buferi, fermentlər qarışığı və s. var. Bufer məhlulunda artıq Mg var.2+və dNTP.Bundan əlavə, qeyri-spesifik PCR gücləndirilməsini effektiv şəkildə maneə törədən və çoxsaylı qPCR reaksiyalarının gücləndirmə səmərəliliyini artıra bilən amillər əlavə olunur ki, bu da gücləndirmə səmərəliliyini təmin edə və çoxsaylı gücləndirmə reaksiyasını həyata keçirə bilər.Aerozolla çirklənmə riskinin qarşısının alınması üçün dUTP/UDG sistemi əlavə edilmişdir.
Komponentlər
1. Bufer
2. Ferment qarışığı
Spesifikasiya
| İsti başlanğıc | Quraşdırılmış isti başlanğıc |
| Aşkarlama üsulu | Primer-zond aşkarlanması |
| PCR üsulu | Bir addım RT-qPCR |
| Polimeraza | Taq DNT polimeraza |
| Nümunə növü | DNT |
Saxlama şərtləri
Məhsul quru buzla göndərilir və -25~-15℃ temperaturda 1 il saxlanıla bilər.Tez-tez qarşısını almaq lazımdırdonma-ərimə.Ayrı-ayrılıqda saxlamaq tövsiyə olunur.
Təlimatlar
1.Reaksiya Sistem
| Komponentlər | Həcm (μL) | Son Konsentrasiya |
| 2 × MP Bufer | 12.5 | 1× |
| Ferment qarışığı | 1 | - |
| Primer/Prob qarışığı (2,5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Şablon RNT | 1-10 | - |
| RNazsız H2O | 25-ə qədər | - |
Qeydlər:
İstifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırdığınızdan əmin olun, şiddətli vibrasiya nəticəsində yaranan həddindən artıq baloncuklardan qaçın.
a.Astar konsentrasiyası: Vəziyyətdən asılı olaraq, astarın optimal konsentrasiyası 0.l ilə 1.0μM arasında ola bilən multipleks primer daxil olmaqla primer qarışığı.
b.Zond konsentrasiyası: Vəziyyətdən asılı olaraq, 0,05 və 0,5 μM arasında ola bilən optimal zond konsentrasiyası, multileks zond etiketləmə fərqi flüoresan qrupu daxil olmaqla zond qarışığı.
c.Şablonun seyreltilməsi: qPCR yüksək həssasdır və şablonu seyreltmək tövsiyə olunur.Nəzarət Ct dəyəri 20 ilə 35 arasında uyğundur.
d.Sistemin hazırlanması: Zəhmət olmasa, ultra təmiz iş masasında, pipettorda və reaksiya borusunda nukleaz qalıqları olmadan hazırlayın;tapança başlığını filtr elementi ilə istifadə etmək tövsiyə olunur.Çarpaz çirklənmədən və aerozolla çirklənmədən çəkinin.
2. Optimallaşdırılmış VelosipedProtokol
| Velosiped addım | Temp. | Vaxt | Velosipedlər |
| Əks transkripsiya | 50℃a | 20 dəq | 1 |
| İlkin-denaturasiya | 95℃ | 5 dəq | 1 |
| Gücləndirmə reaksiyası | 95℃ | 15san |
40-45 |
| 60℃ b | 30san c |
Qeydlər:
a.Əks transkripsiya: Temperatur 42°C və ya 50°C seçə bilər.
b.Gücləndirmə reaksiyası: Temperatur dizayn edilmiş primerlərin Tm dəyərinə uyğun olaraq tənzimlənir.
c.Floresans siqnalının alınması: Zəhmət olmasa, eksperimental proseduru alət təlimatının tələblərinə uyğun olaraq təyin edin.
Qeydlər
Zəhmət olmasa sağlamlığınızı və təhlükəsizliyinizi təmin etmək üçün laboratoriya paltarı və əlcək kimi lazımi şəxsi qoruyucu vasitələrdən istifadə edin.
