Multiplex qPCR Probe Premix
Pişik nömrəsi: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Boya Əsaslı) yüksək həssaslıq və spesifikliklə xarakterizə olunan, mavi rəngə malik və nümunə əlavəsi effektinə malik real vaxt rejimində 2 × kəmiyyət PCR gücləndirilməsi üçün ilkin həlldir.Bu məhsul bir reaksiya quyusunda dörd flüoresan kəmiyyət PCR reaksiyasına imkan verən 2× Qarışıq əvvəlcədən qarışdırılmış reagentdir.Bu məhsul gücləndirmə həssaslığını və spesifikliyini əhəmiyyətli dərəcədə yaxşılaşdıran Taq fermentini isti işə salmaq üçün genetik cəhətdən dəyişdirilmiş antikor metodunu ehtiva edir.Eyni zamanda, bu məhsul çox reaksiyalı tamponu dərindən optimallaşdırmışdır ki, bu da reaksiyanın gücləndirmə səmərəliliyini yaxşılaşdıra və aşağı konsentrasiyalı şablonların effektiv gücləndirilməsini təşviq edə bilər.Bu məhsul genotipləşdirmə və multipleks kəmiyyət analizi üçün istifadə edilə bilər.
Spesifikasiya
| İsti başlanğıc | Quraşdırılmış isti başlanğıc |
| Aşkarlama üsulu | Primer-zond aşkarlanması |
| PCR üsulu | qPCR |
| Polimeraza | Taq DNT polimeraza |
| Nümunə növü | DNT |
Saxlama şərtləri
Məhsul quru buzla göndərilir və -25~-15℃ temperaturda 2 il saxlanıla bilər.
Təlimatlar
1. ReaksiyaSistem
| Komponentlər | Həcm (μL) | Son Konsentrasiya |
| 2× TaqMan multipleks qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Astar qarışığı (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Zond qarışığı (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox istinad boyası | 0.5 | 1× |
| Şablon DNT/cDNA | 1-10 | - |
| gg2O | 25-ə qədər | - |
Qeydlər:Güclü sarsıntıdan həddindən artıq baloncukların qarşısını almaq üçün istifadə etməzdən əvvəl hərtərəfli qarışdırın.
a.Primer konsentrasiyası: Primer Qarışıq bir neçə cüt primerdən ibarətdir, adətən hər bir primer 0,2 μmol/L son konsentrasiyadadır və həmçinin müvafiq olaraq 0,1 və 0,5 μmol/L arasında tənzimlənə bilər.
b.Zond konsentrasiyası: Zond Qarışığı müxtəlif flüoresan siqnalları olan çoxsaylı zondlardan ibarətdir və hər bir zondun konsentrasiyası xüsusi vəziyyətə uyğun olaraq 50 və 250 nmol/L arasında tənzimlənə bilər.
1.Rox boya istinadı: Quyular arasında yaranan flüoresan siqnalın xətasını düzəltmək üçün Tətbiqi Biosistemlər kimi Real Time PCR gücləndirmə alətində istifadə olunur;bu məhsulda Rox boya istinadı yoxdur.Lazım gələrsə, Cas # 10200 tövsiyə olunur.
2.Şablonun seyreltilməsi: qPCR yüksək həssasdır və istifadə üçün şablonu seyreltmək tövsiyə olunur.Şablon cDNA ehtiyat məhluludursa, şablonun həcmi ümumi həcmin 1/10-dan çox olmamalıdır.
3.Reaksiya sistemi: Hədəf gen gücləndirilməsinin effektivliyini və təkrarlanmasını təmin etmək üçün 25μL,30μL və ya 50 μL tövsiyə olunur.
4.Sistemin hazırlanması: Zəhmət olmasa, super təmiz skamyada hazırlayın və ucları və reaksiya borularını nukleaz qalıqları olmadan istifadə edin;uclarından filtr kartricləri ilə istifadə etmək tövsiyə olunur.Çarpaz çirklənmədən və aerozolla çirklənmədən çəkinin.
2.Reaksiya proqramı
| Velosiped addımı | Temp. | Vaxt | Velosipedlər |
| İlkin-denaturasiya | 95 ℃ | 5 dəq | 1 |
| Denatürasiya | 95 ℃ | 15san | 45 |
| Qızartma/uzatma | 60 ℃ | 30san |
Qeydlər:
1.Tavlama/Uzatma: Temperatur və vaxt dizayn edilmiş primer Tm dəyərinə uyğun olaraq uyğun şəkildə tənzimlənə bilər.
2.Floresensiya siqnalının alınması: Fərqli qPCR aşkarlama alətləri üçün tələb olunan flüoresan siqnalın alınması müddəti fərqlidir, lütfən, minimum vaxt limitinə uyğun olaraq təyin edin.Bir neçə ümumi alətin vaxtı aşağıdakı kimi müəyyən edilir:
20 saniyə: Tətbiqi Biosistemlər 7700, 7900HT, 7500 Sürətli
31 san: Tətbiqi Biosistemlər 7300
32 san: Tətbiqi Biosistemlər 7500
Qeydlər
Zəhmət olmasa, sağlamlığınızı və təhlükəsizliyinizi təmin etmək üçün lazımi şəxsi qoruyucu vasitələrdən, laboratoriya paltarlarından və əlcəklərdən istifadə edin!
