Bst 2.0 DNT Polimeraz (Qliserinsiz, yüksək sıxlıq)
Bst DNT polimeraza V2, 5′→3′ DNT polimeraza aktivliyinə və güclü zəncir əvəzetmə fəaliyyətinə malik olan, lakin 5′→3′ eksonükleaza aktivliyi olmayan Bacillus stearothermophilus DNT Polimerase I-dən əldə edilmişdir.Bst DNT Polymerase V2 zəncirlə yerdəyişmə, izotermik gücləndirmə LAMP (Loop vasitəçiliyi ilə izotermik gücləndirmə) və sürətli ardıcıllıq üçün idealdır.Bu Bst DNT polimeraza V2 otaq temperaturunda DNT polimeraz fəaliyyətini maneə törətməyə qadirdir ki, o, otaq temperaturunda işlədilə və reaksiya sistemi formalaşa, qeyri-spesifik gücləndirmənin qarşısını ala və reaksiyanın effektivliyini artıra bilər və bu versiya ola bilər. liofilizasiya olunsun.Bundan əlavə, o, yüksək temperaturda fəaliyyətini sərbəst buraxmağa qadirdir, beləliklə, ayrıca aktivləşdirmə mərhələsinə ehtiyacı aradan qaldırır.
Komponentlər
| Komponent | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst DNT polimeraza V2 (Qliserinsiz) (32U/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| 10×HC Bst V2 Bufer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Tətbiqlər
1.LAMP izotermik gücləndirmə
2.DNT zəncirinin tək yerdəyişmə reaksiyası
3.Yüksək GC gen ardıcıllığı
4.Nanoqram səviyyəsində DNT ardıcıllığı.
Saxlama Vəziyyəti
0°C altında daşınmalı və -25°C~-15°C temperaturda saxlanılmalıdır.
Vahid Tərifi
Bir vahid 65°C-də 30 dəqiqə ərzində 25 nmol dNTP-ni turşuda həll olunmayan materiala daxil edən fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.
LAMP reaksiyası
| Komponentlər | 25 μLSistem |
| 10×HC Bst V2 Bufer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (hər biri 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Yaşıl (25×)a | 1,0 μL |
| Astar qarışığıb | 6 μL |
| Bst DNT Polimerase V2 (Qliserolsuz) (32 U/uL) | 0,25 μL |
| Şablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL-ə qədər |
Qeydlər:
1) a.SYTOTM 16 Yaşıl (25×): Təcrübə ehtiyaclarına uyğun olaraq digər boyalar əvəzedici kimi istifadə edilə bilər;
2) b.Primer qarışığı: 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2.5 µM F3, 2.5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB və digər həcmlərin qarışdırılması ilə əldə edilir.
Reaksiya və vəziyyət
1 × HC Bst V2 Bufer, inkubasiya temperaturu 60°C ilə 65°C arasındadır.
İstilik inaktivasiyası
80°C, 20 dəq.
