CHO HCP ELISA dəsti
Bu analizdə bir addımlı immunosorbent ELISA metodundan istifadə olunur.CHOK1 HCP ehtiva edən nümunələr eyni vaxtda HRP etiketli keçi anti-CHOK1 antikoru və ELISA lövhəsi ilə örtülmüş anti-CHOK1 antikoru ilə reaksiya verir və nəhayət bərk fazalı antikor-HCP etiketli antikordan ibarət sendviç kompleksi əmələ gətirir.Bağlanmamış antigen-antikor ELISA plitəsinin yuyulması ilə çıxarıla bilər.TMB substratı kifayət qədər reaksiya üçün quyuya əlavə edilir.Dayanma məhlulu əlavə edildikdən sonra rəng inkişafı dayandırılır və 450/650nm-də reaksiya məhlulunun OD və ya absorbsiya dəyəri mikroplata oxuyucusu ilə oxunur.OD dəyəri və ya absorbsiya dəyəri məhluldakı HCP tərkibinə mütənasibdir.Bundan məhluldakı HCP konsentrasiyası standart əyriyə uyğun olaraq hesablana bilər.
Ərizə
Bu dəst nümunələrdə CHOK1 ana hüceyrə zülal qalıqlarının məzmununu kəmiyyətcə aşkar etmək üçün istifadə olunur.
Copponentlər
| S/N | Komponent | Konsentrasiya | Saxlama şərtləri |
| 1 | CHOK1 HCP Standartı | 0,5 mq/mL | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mq/mL | ≤–20℃, işıqdan qoruyun |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, işıqdan qoruyun |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8° isti |
| 5 | Həllini dayandırın | NA | RT |
| 6 | Mikroplitə möhürləyiciləri | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8° isti |
| 8 | Yüksək adsorbsiyaya malik ilkin örtüklü Plitələr | NA | 2-8° isti |
Tələb olunan avadanlıq
| İstehlak materialları / Avadanlıq | İstehsal | Kataloq |
| Mikroplaka oxuyucusu | Molekulyar Cihazlar | Spectra Max M5, M5e və ya ekvivalent |
| Termomikser | Ependorf | Eppendorf/5355 və ya ekvivalenti |
| Vorteks qarışdırıcı | IKA | MS3 Rəqəmsal və ya ekvivalenti |
Saxlama və sabitlik
1.-25~-15°C temperaturda daşınma.
2.Saxlama şəraiti Cədvəl 1-də göstərildiyi kimidir;komponentlər 1-2 saxlanılır ≤–20°C, 5-6 RT,3、4、7、8 2-8 ℃ temperaturda saxlanılır;etibarlılıq müddəti 12 aydır.
Məhsul parametrləri
1.Həssaslıq: 1ng/ml
2.Aşkarlama diapazonu:3-100ng/ml
3.Dəqiqlik: İntra-analiz CV≤ 10%, inter-analiz CV≤ 15%
4.HCP əhatə dairəsi: >80%
5.Spesifiklik: Bu dəst universaldır, çünki təmizlənmə prosesindən asılı olmayaraq CHOK1 HCP ilə xüsusi reaksiya verir.
Reagentin hazırlanması
1.PBST 0,05%
15 ml 20×PBST 0,05%, ddH ilə seyreltilir2O, və 300 ml-ə qədər.
2.1,0% BSA
Şüşədən 1 q BSA götürün və 100 ml PBST 0,05% -də seyreltin, tamamilə həll olunana qədər yaxşıca qarışdırın və 2-8°C temperaturda saxlayın.Hazırlanmış seyreltmə tamponu 7 gün ərzində etibarlıdır.Lazım olduğu kimi hazırlamaq tövsiyə olunur.
3.Aşkarlama məhlulu 2μg/ml
48μL 0,5 mq/mL Anti-CHO HCP-HRP götürün və 2μg/mL aşkarlama məhlulunun yekun konsentrasiyası əldə etmək üçün 11,952μL 1% BSA-da seyreltin.
4.QC və CHOK1 HCP Standartlarının Hazırlanması
| boru Yox. | Orijinal | Konsentrasiya | Həcmi | 1% BSA | ümumi Həcmi | Final |
| A | Standart | 0,5 mq/mL | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Cədvəl: QC və Standartların hazırlanması
Təhlil Proseduru
1.Reagentləri yuxarıdakı “Reagentin hazırlanması” bölməsində göstərildiyi kimi hazırlayın.
2.Hər quyuya 50μL standartlar, nümunələr və QC (Cədvəl 3-ə baxın) götürün, sonra 100μL Aşkarlama məhlulu (2μg/mL) əlavə edin;Plitəni möhürləyici ilə örtün və ELISA boşqabını termomikserin üzərinə qoyun.2 saat ərzində 500 rpm, 25±3 ℃-də inkubasiya edin.
3.Mikroplitəni lavaboya çevirin və örtük məhlulunu atın.ELISA boşqabını yumaq və məhlulu atmaq üçün hər bir quyuya 300μL PBST 0.05% pipetlə çəkin və yumağı 3 dəfə təkrarlayın.Plitəni təmiz bir kağız dəsmala çevirin və qurudun.
4.Hər quyuya 100μL TMB substratı əlavə edin (Cədvəl 1-ə baxın), ELISA boşqabını bağlayın və qaranlıqda 25±3℃ temperaturda 15 dəqiqə inkubasiya edin.
5.Hər quyuya 100 μL stop məhlulu pipetlə çəkin.
6.Mikroplata oxuyucusu ilə 450/650nm dalğa uzunluğunda absorbsiyanı ölçün.
7.SoftMax və ya ekvivalent proqram təminatı ilə məlumatları təhlil edin.Dörd parametrli logistik reqressiya modelindən istifadə edərək standart əyrini çəkin.
Standart əyri nümunəsi
QEYD: Nümunədə HCP konsentrasiyası standart əyrinin yuxarı həddini keçərsə, sınaqdan əvvəl onu seyreltmə tamponu ilə düzgün şəkildə seyreltmək lazımdır.
QEYDLƏR
Dayanacaq məhlulu 2M sulfat turşusudur, sıçramamaq üçün ehtiyatla davranın!
