DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
Pişik №: HC4007A
DNaz I (Dezoksiribonukleaza I) tək və ya cüt zəncirli DNT-ni həzm edə bilən endodeoksiribonukleazdır.O, 5'-terminalda fosfat qrupları və 3'-terminalda hidroksil olan monodeoksinukleotidlər və ya tək və ya ikiqat zəncirli oliqodeoksinukleotidlər istehsal etmək üçün fosfodiester bağlarını tanıyır və parçalayır.DNaz I-in aktivliyi Ca-dan asılıdır2+və Mn kimi ikivalentli metal ionları ilə aktivləşdirilə bilər2+və Zn2+.5 mM Ca2+fermenti hidrolizdən qoruyur.Mg iştirakı ilə2+, ferment təsadüfi olaraq DNT-nin istənilən zəncirindəki hər hansı bir yeri tanıya və parçalaya bilərdi.Mn-nin iştirakı ilə2+, DNT-nin ikiqat zəncirləri eyni vaxtda tanınır və 1-2 nukleotid çıxıntılı düz uçlu DNT fraqmentləri və ya yapışqan uçlu DNT fraqmentləri yaratmaq üçün demək olar ki, eyni yerdə parçalana bilər.
Komponentlər
| ad | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNaz I, RNazsız | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Bufer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 mL |
Saxlama şəraiti
Saxlama üçün -25 ℃ ~ -15 ℃;Buz paketləri altında daşınma.
Təlimatlar
1. Aşağıdakı nisbətlərə uyğun olaraq RNazsız boruda reaksiya məhlulunu hazırlayın:
| Komponent | Həcmi |
| RNT | X µg |
| 10 × DNase I Bufer | 1μL |
| DNaz I, RNazsız (5U/μL) | µg RNT üçün 1 U① |
| gg2O | 10μL-ə qədər |
Qeyd: ①RNT miqdarına əsasən əlavə edilməli olan DNase I-in həcmini hesablayın.
2. 37 ℃ 15 dəqiqə;
3. 2,5 mM~5 mM yekun konsentrasiyaya 0,5M EDTA əlavə edin və reaksiyanı dayandırmaq üçün 10 dəqiqə 65 ℃ temperaturda qızdırın.Nümunə tərs transkripsiya kimi növbəti reaksiya üçün birbaşa istifadə edilə bilərtəcrübə.
Vahid Tərifi
Bir vahid 1µg pBR322-ni tamamilə parçalayacaq fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir37 ° C-də 10 dəqiqə ərzində DNT.
Keyfiyyətə nəzarət
RNaz:37°C temperaturda 4 saat ərzində 1.6µg MS2 RNT ilə 5U DNase I heç bir deqradasiyaya səbəb olmur.agaroz gel elektroforezi ilə müəyyən edilir.
Qeydlər
1. Zəhmət olmasa özünüz 0,5 MEDTA hazırlayın.
2. Hər µg RNT üçün 1U DNase I istifadə edin.Bununla belə, RNT 1µg-dən azdırsa, lütfən, 1U DNase I istifadə edin.
3. Əməliyyat zamanı fermenti buzun üzərinə qoyun.
