2×HiF Taq plus Master Mix
Pişik №: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Boya ilə) Plus HIF DNT Polimerase, dNTPs və optimallaşdırılmış buferdən ibarət istifadəyə hazır 2×əvvəlcədən qarışdırılmış məhluldur.Otaq temperaturunda polimeraza aktivliyini və 3′→5′eksonükleaz fəaliyyətini maneə törədən iki monoklonal antikor asanlıqla və yüksək spesifik Hot Start PCR üçün master mixə əlavə edilir.Fermentə uzun fraqment gücləndirmə qabiliyyəti vermək üçün genişlənmə faktoru master mixə əlavə edilir, gücləndirmənin uzunluğu 13 kb-a qədər ola bilər, ferment 5′→3′ DNT polimeraza aktivliyinə və 3′→5′ ekzonükleaz aktivliyi, onun sədaqəti Taq DNT polimerazından 83 dəfə, bu da adi DNT polimerazasından 9 dəfə çoxdur.Mürəkkəb şablonların gücləndirilməsi üçün uyğundur, gücləndirmə məhsulu küt ucdur.
2×HIF Taq plus Master Mix(Boya ilə) sürətli və asan, yüksək həssaslıq, güclü spesifiklik, yaxşı dayanıqlıq və s. üstünlüklərə malikdir, reaksiya sisteminə yalnız primerlər və şablonlar əlavə etmək lazımdır və onu iki-üç tənzimləmə ilə gücləndirmək olar. addım protokolu, eksperimental addımların sadələşdirilməsi və vaxta qənaət.Bu məhsulun tərkibində elektroforez indikator boyaları var və PCR məhsulları birbaşa elektroforez üçün istifadə edilə bilər.Bundan əlavə, məhsulun tərkibində xüsusi qoruyucu vasitə də var ki, master-miks təkrar dondurma-ərimədən sonra sabit fəaliyyəti saxlaya bilsin.
Saxlama şərtləri
Məhsullar -25~-15°C temperaturda 1 il saxlanmalıdır.
Spesifikasiyalar
| Məhsulun spesifikasiyası | Master Mix |
| Konsentrasiya | 2× |
| İsti başlanğıc | Quraşdırılmış İsti başlanğıc |
| Aşınma | Küt |
| Reaksiya sürəti | Sürətli |
| Ölçü (Son məhsul) | 13 kb-a qədər |
| Daşınma şərtləri | Quru buz |
| Məhsulun növü | Yüksək keyfiyyətli PCR premiksləri |
Təlimatlar
1.PCR Reaksiya Sistemi
| Komponentlər | Həcm (μL) |
| DNT Şablonu | Uyğundur |
| İrəli primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| Ters astar (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| gg2O | 50-yə qədər |
2.Müxtəlif şablonların istifadəsi tövsiyə olunur
| Şablon növü | Fraqmentləri 1kb-dan 10kb-a qədər gücləndirin |
| Genomik DNT | 50-200 ng |
| Plazmid və ya Viral DNT | 10 q-20 q |
| cDNA | 1-2,5 µL (Son PCR reaksiya həcminin 10%-ni keçməyin) |
3.Gücləndirmə Protokolu
1) İki Addımlı Protokol (mürəkkəblik şablonu)
| Velosiped addımı | Temp. | Vaxt | Velosipedlər |
| İlkin denatürasiya | 98℃ | 3 dəq | 1 |
| Denatürasiya | 98℃ | 10san | 30-35 |
| Uzatma | 68℃ | 30 san/kb | |
| Son uzadılma | 72℃ | 5 dəq | 1 |
2) Üç Addımlı Protokol (adi protokol)
| Velosiped addımı | Temp. | Vaxt | Velosipedlər |
| İlkin denatürasiya | 98℃ | 3 dəq | 1 |
| Denatürasiya | 98℃ | 10san | 30-35 |
| Qızartma | 60℃ | 20 san | |
| Uzatma | 72℃ | 30 san/kb | |
| Son uzadılma | 72℃ | 5 dəq | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (mürəkkəblik şablonu)
| Velosiped addımı | Temperatur | Vaxt | Velosipedlər |
| İlkin denatürasiya | 98℃ | 3 dəq | 1 |
| Denatürasiya | 98℃ | 10 san | 15 (dövr başına 1℃ azalma) |
| Gradient tavlama | 70-55 ℃ | 20 san | |
| Uzatma | 72℃ | 30 san/kb | |
| Denatürasiya | 98℃ | 10 san |
20 |
| Qızartma | 55℃ | 20 san | |
| Uzatma | 72℃ | 30 san/kb | |
| Son uzadılma | 72℃ | 5 dəq | 1 |
Fərqli gücləndirmə protokolu altındakı xüsusiyyətlər
| Protokol | İki addımlı | Üç pilləli | Gradient tavlama |
| Xüsusi. | sürətli | orta | yavaş |
| Spesifiklik | yüksək | orta | yüksək |
| PCR məhsuldarlığı | orta | yüksək | orta |
| Aşkarlanma dərəcəsi | yüksək | orta | yüksək |
Qeydlər
Zəhmət olmasa, sağlamlığınızı və təhlükəsizliyinizi təmin etmək üçün lazımi şəxsi qoruyucu vasitələrdən, laboratoriya paltarlarından və əlcəklərdən istifadə edin!
