Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) molekulyar çəkisi təxminən 13,7 kDa olan 4 disulfid bağı olan bir zəncirli polipeptiddir.RNase A, C və U qalıqlarında xüsusi olaraq tək zəncirli RNT-ni parçalayan endoribonükleazdır.Xüsusilə, parçalanma bir nukleotidin 5′-ribozu və bitişik pirimidin nukleotidinin 3′-ribozasındakı fosfat qrupu tərəfindən əmələ gələn fosfodiester bağını tanıyır, beləliklə, 2, 3′-Siklik fosfatlar müvafiq 3-ə hidroliz edilir. ′nukleozid fosfatlar (məsələn, pG-pG-pC-pA-pG, pG-pG-pCp və A-PG yaratmaq üçün RNase A tərəfindən parçalanır).RNase A tək zəncirli RNT-nin parçalanmasında ən aktivdir.Tövsiyə olunan iş konsentrasiyası 1-100μG/mL-dir, müxtəlif reaksiya sistemlərinə uyğundur.Aşağı duz konsentrasiyası (0-100 mM NaCl) RNT-DNT hibridləşməsi ilə əmələ gələn tək zəncirli RNT, iki zəncirli RNT və RNT zəncirlərini kəsmək üçün istifadə edilə bilər.Bununla belə, yüksək duz konsentrasiyasında (≥0,3 M) RNase A yalnız spesifik olaraq tək zəncirli RNT-ni parçalayır.
RNase A ən çox plazmid DNT və ya genomik DNT-nin hazırlanması zamanı RNT-ni çıxarmaq üçün istifadə olunur. Hazırlıq prosesi zamanı DNaz-ın aktiv olub-olmaması reaksiyaya asanlıqla təsir göstərə bilər.Ənənəvi su banyosunda qaynatma üsulu DNaz aktivliyini təsirsiz hala gətirmək üçün istifadə edilə bilər.Bu məhsulda DNaz və proteaz yoxdur və istifadədən əvvəl istilik müalicəsi tələb olunmur.Bundan əlavə, bu məhsul RNaz qoruma analizi və RNT ardıcıllığı analizi kimi molekulyar biologiya təcrübələrində də istifadə edilə bilər.
Saxlama şərtləri
Məhsul -25～-15 ℃ temperaturda saxlanıla bilər, etibarlılıq müddəti 2 ildir.
Təlimatlar
Bu, RNase A saxlama məhlulunun hazırlanması üçün ümumi üsullardan biridir.tərəfindən də hazırlana bilərlaboratoriyada və ya istinad ədəbiyyatında ənənəvi üsullara uyğun olaraq digər üsullar (məsələn10 mM Tris-HCl, pH 7.5 və ya Tris-NaCl məhlulunda birbaşa həll olunur)
1. 10 mg/mL RNase A saxlama məhlulu hazırlamaq üçün 10 mM natrium asetatdan (pH 5.2) istifadə edin.
2. 100 ℃ temperaturda 15 dəqiqə qızdırın
3. Otaq temperaturuna qədər soyudun, 1/10 həcmində 1 M Tris-HCl (pH 7.4) əlavə edin, pH-nı 7.4-ə tənzimləyin (üçün).məsələn, 500 ml 10q/ml RNase saxlama məhlulu 1M Tris-HCL, PH7.4 əlavə edin)
4. Dondurulmuş saxlama üçün -20 ℃ temperaturda alt qablaşdırılır, 2 ilə qədər dayanıqlı ola bilər.
[Qeydlər]: Neytral şəraitdə RNaseA məhlulunu qaynadarkən RNase çöküntüsü əmələ gələcək;Daha aşağı bir pH-da qaynadın və yağıntı varsa, zülal çirklərinin olması ilə bağlı ola biləcək müşahidə edilə bilər.Qaynadıqdan sonra çöküntü aşkar edilərsə, çirkləri yüksək sürətli sentrifuqalama (13000 rpm) ilə çıxarmaq və sonra dondurmaq üçün alt qablaşdırma etmək olar.
Məhsul haqqında məlumat
| Sinonimlər | Ribonukleaza I;pankreas ribonukleaza;Ribonukleaza 3'-pirimidnooliqonükleotidohidrolaza;Rnase A;Endoribonulseaz I |
| CAS nömrəsi | 9001-99-4 |
| Görünüş | Ağ liyofilləşdirilmiş toz |
| Molekulyar çəki | ~ 13.7kDa (amin turşusu ardıcıllığı) |
| Ph dəyəri | 7.6 (fəaliyyət diapazonu 6-10) |
| Uyğun Temperatur | 60℃ (Fəaliyyət diapazonu 15-70℃) |
| Aktivləşdirici agent | Na2+.K+ |
| İnhibitor | Rnase inhibitoru |
| İnaktivasiya üsulu | İstilik yolu ilə təsirsiz hala gətirilə bilməz, sentrifuqa sütunundan istifadə etmək tövsiyə olunur |
| Mənşə | iribuynuzlu |
| Həlledicilik | Suda həll olunur (10mq/ml) |
| Quruda itki | ≤5,0% |
| Ferment fəaliyyəti | ≥60 Kunitz vahidi/mq |
| İzoelektrik nöqtə | 9.6 |
Qeydlər
Təhlükəsizliyiniz və sağlamlığınız üçün lütfən, əməliyyat üçün laboratoriya paltarları və birdəfəlik əlcəklər geyinin.
