RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Bu məhsulda reaksiya tamponu, RT-Fermentlər Qarışığı (Bst DNT polimeraza və istiliyədavamlı əks transkriptaza), liyofilləşdirilmiş qoruyucu maddələr və xromogen boya komponentləri var.İstifadə etmək üçün sadəcə Buferdən istifadə edin, reaksiya fermenti və primer qarışdırılır və şablona əlavə edilir;liyofilləşdirilmiş qoruyucu əlavə düz ola bilər.Liyofilizatora qoşuldu və liyofilləşdirildi və istifadə edildikdə yalnız primerlər və şablonlar əlavə edildi.Bu dəst gücləndirmənin sürətli, aydın vizual aşkarlanmasını təmin edir, mənfi reaksiya qırmızı rənglə, müsbət reaksiya isə sarıya dəyişmə ilə göstərilir.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Döngə vasitəçiliyi ilə gücləndirmə tamponu (boya ilə) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| RT-fermentlər qarışığı | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 ml×10 |
| Liyofilləşdirilmiş qoruyucu | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Tətbiqlər
DNT və ya RNT izotermik gücləndirilməsi üçün.
Saxlama şərtləri
Quru buzla daşınır, -25 ~ -15 ℃ temperaturda saxlanılır.Tez-tez donma-ərimədən çəkinin, məhsul 12 ay etibarlıdır.
Protokol
1.İstifadə olunacaq reaksiya tamponunu otaq temperaturunda əridin.Hərtərəfli qarışdırmaq üçün boruları qısa müddətə burulğan edin və ya bir neçə dəfə çevirin, sonra mayeni borunun dibinə toplamaq üçün sentrifuqa edin.
2.Reaksiya sisteminin hazırlanması.Bu reagent iki reaksiya sistemində, maye reaksiya qarışığında və liyofilləşdirilmiş sistem qarışığında hazırlana bilər.
1) Maye reaksiya qarışığı hazırlayın
| Komponent | Həcmi |
| Döngə vasitəçiliyi ilə gücləndirmə tamponu (boya ilə) | 10 μL |
| RT-fermentlər qarışığı | 2,8 μL |
| 10 × Astar Qarışığıa | 5 μL |
| Şablonlar DNT/RNT b | × μL |
| Nukleazsız Su | 50 μL-ə qədər |
2) Liyofilizasiya sistemi qarışığı
① Liyofilləşdirilmiş qarışığı hazırlayın
| Komponent | Həcmi |
| Döngə vasitəçiliyi ilə gücləndirmə tamponu (boya ilə) | 10 μL |
| Liyofilləşdirilmiş qoruyucu | 20 μL |
| RT-fermentlər qarışığı | 2,8 μL |
| Nukleazsız Su | 50 μL-ə qədər |
② Liyofilizasiya: Hazırlanmış Qarışıq 50μL sistemdə liofilizasiya edilmişdir
③ Reaksiya qarışığını hazırlayın
| Komponent | Həcmi |
| Liyofilləşdirilmiş qarışıq | 1 ədəd |
| 10 × Astar Qarışığıa | 5 μL |
| Şablonlar DNT/RNT b | × μL |
| Nukleazsız Su | 50 μL-ə qədər |
Qeydlər:
1) a.10×Primer Qarışığı: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Döngü F/B;
2) b.DEPC (suda həll olunan) nuklein turşusu templ üçün tövsiyə olunur.
1.30-45 dəqiqə ərzində 65°C-də inkubasiya edin, bu müddət rəng dəyişikliyinə uyğun olaraq müvafiq şəkildə uzadıla bilər.
2.Adi gözlə görə, sarı müsbət, qırmızı isə mənfi idi.
Qeydlər
1.Tampon borusunun dibində duz görünə bilər, otaq temperaturunda yaxşıca qarışdırmaq üçün boruları qısa müddətə buruldaya və ya bir neçə dəfə çevirə bilər.
2.Reaksiya temperaturu primerlərin vəziyyətinə görə 62 ℃ ilə 68 ℃ arasında optimallaşdırıla bilər.
3.Qablaşdırılmış reagentlər uzun müddət havaya məruz qalmamalıdır.
4.Qırmızı və sarı rəngsizləşmə reaksiyası reaksiya sisteminin pH dəyişməsindən asılıdır, lütfən, ddH istifadə etmək tövsiyə olunan Tris nuklein turşusu saxlama məhlulundan istifadə etməyin.2O saxlanılan nuklein turşusu;
5.Təcrübə standartlaşdırılmalıdır, o cümlədən reaksiya sisteminin hazırlanması, liyofilizasiya və nümunənin emalı və nümunənin əlavə edilməsi prosesi;
6.Çirklənmənin qarşısını almaq üçün reaksiya sistemini ultra təmiz skamyada hazırlamaq tövsiyə olunur, digərlərində yanlış müsbət müdaxilənin qarşısını almaq üçün otağın duman qapağına şablonlar əlavə edin.
