Warm Start Bst 2.0 DNT Polimerase (Qliserolsuz)
Bst DNT polimeraza V2, 5′→3′ DNT polimeraza aktivliyinə və güclü zəncir əvəzetmə fəaliyyətinə malik olan, lakin 5′→3′ eksonükleaza aktivliyi olmayan Bacillus stearothermophilus DNT Polimerase I-dən əldə edilmişdir.Bst DNT Polymerase V2 zəncirlə yerdəyişmə, izotermik gücləndirmə LAMP (Loop vasitəçiliyi ilə izotermik gücləndirmə) və sürətli ardıcıllıq üçün idealdır.Bst DNT polimeraza V2, Bst DNT polimeraza V2 (HC5005A) əsasında, geri çevrilə bilən modifikasiya texnologiyası ilə əldə edilmiş, otaq temperaturunda DNT polimeraz fəaliyyətini maneə törədə bilən qaynar başlanğıc versiyasıdır, beləliklə, reaksiya sistemi otaq temperaturunda işlədilə və formalaşdırıla bilər. -xüsusi gücləndirmə və reaksiyanın effektivliyini artırır və bu versiya liyofilləşdirilə bilər.Bundan əlavə, onun fəaliyyəti yüksək temperaturda buraxılır, buna görə də ayrıca aktivləşdirmə mərhələsinə ehtiyac yoxdur.
Komponentlər
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNT polimeraza V2 (Qliserinsiz)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Bufer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Tətbiqlər
1.LAMP izotermik gücləndirmə
2.DNT zəncirinin tək yerdəyişmə reaksiyası
3.Yüksək GC gen ardıcıllığı
4.Nanoqram səviyyəsində DNT ardıcıllığı.
Saxlama Vəziyyəti
0°C altında daşınmalı və -25°C~-15°C temperaturda saxlanılmalıdır.
Vahid Tərifi
Bir vahid 65°C-də 30 dəqiqə ərzində 25 nmol dNTP-ni turşuda həll olunmayan materiala daxil edən fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.
Keyfiyyətə nəzarət
1.Protein Saflığının Təhlili (SDS-PAGE):Bst DNT polimeraz V2-nin təmizliyi Coomassie Blue aşkarlama metodundan istifadə etməklə SDS-PAGE analizi ilə müəyyən edilir ≥99%.
2.EnonukleazFəaliyyət:Minimum 8 U Bst DNT polimeraza V2 olan 50 μL reaksiyanın 1 μg λDNT ilə 37 ℃ temperaturda 16 saat inkubasiyası müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
3.Eksonükleaz fəaliyyəti:Minimum 8 U Bst DNT polimeraza V2 olan 50 μL reaksiyanın 1 μg λ -Hind Ⅲ həzm DNT ilə 37 ℃ temperaturda 16 saat ərzində inkubasiyası müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
4.Nickase Fəaliyyəti:Minimum 8 U Bst DNT polimeraza V2 olan 50 μL reaksiyanın 1 μg pBR322 DNT ilə 37°C-də 16 saat ərzində inkubasiyası müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
5.RNaz Fəaliyyəti:Minimum 8 U Bst DNT polimeraza V2 olan 50 μL reaksiyanın 1,6 μg MS2 RNT ilə 37°C-də 16 saat ərzində inkubasiyası müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
6.E. coliDNT:120 U Bst DNT polimeraz V2 E. coli 16S rRNA lokusu üçün spesifik primerlərlə TaqMan qPCR istifadə edərək E. coli genomik DNT-nin varlığı üçün yoxlanılır.E. coli genomik DNT çirklənməsi ≤1 Nüsxədir.
LAMP reaksiyası
| Komponentlər | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Bufer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (hər biri 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Yaşıl (25×)a | 1,0 μL |
| Astar qarışığıb | 6 μL |
| Bst DNT Polimerase V2 (Qliserolsuz) (8 U/uL) | 1 μL |
| Şablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL-ə qədər |
Qeydlər:
1) a.SYTOTM 16 Yaşıl (25×): Təcrübə ehtiyaclarına uyğun olaraq digər boyalar əvəzedici kimi istifadə edilə bilər;
2) b.Astar qarışığı: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB və digər həcmlərin qarışdırılması ilə əldə edilir.
Reaksiya və vəziyyət
1 × HC Bst V2 Bufer, inkubasiya temperaturu 60°C ilə 65°C arasındadır.
İstilik inaktivasiyası
80°C, 20 dəq
