Bst 2.0 DNT Polimeraz (Qliserolsuz)
Bst DNT polimeraza V2, 5′→3′ DNT polimeraza aktivliyinə və güclü zəncir əvəzetmə fəaliyyətinə malik olan, lakin 5′→3′ eksonükleaza aktivliyi olmayan Bacillus stearothermophilus DNT Polimerase I-dən əldə edilmişdir.Bst DNT Polymerase V2 zəncirlə yerdəyişmə, izotermik gücləndirmə LAMP (Loop vasitəçiliyi ilə izotermik gücləndirmə) və sürətli ardıcıllıq üçün idealdır.
Komponentlər
| Komponent | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimeraz V2 (Qliserinsiz)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Bufer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Tətbiqlər
1.LAMP izotermik gücləndirmə
2.DNT zəncirinin tək yerdəyişmə reaksiyası
3.Yüksək GC gen ardıcıllığı
4. Nanoqram səviyyəsinin DNT ardıcıllığı.
Saxlama Vəziyyəti
0°C altında daşınmalı və -25°C~-15°C temperaturda saxlanılmalıdır.
Vahid Tərifi
Bir vahid 65°C-də 30 dəqiqə ərzində 25 nmol dNTP-ni turşuda həll olunmayan materiala daxil edən fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.
Keyfiyyətə nəzarət
1.Protein Saflığının Təhlili (SDS-PAGE):Bst DNT polimeraz V2-nin təmizliyi Coomassie Blue aşkarlama metodundan istifadə etməklə SDS-PAGE analizi ilə müəyyən edilir ≥99%.
2.Eksonükleaz fəaliyyəti:Minimum 8 U Bst DNT polimeraza V2 olan 50 μL reaksiyanın 1 μg λ -Hind Ⅲ həzm DNT ilə 37 ℃ temperaturda 16 saat ərzində inkubasiyası müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
3.Nickase Fəaliyyəti:Minimum 8 U Bst DNT polimeraza V2 olan 50 μL reaksiyanın 1 μg pBR322 DNT ilə 37°C-də 16 saat ərzində inkubasiyası müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
4.RNaz Fəaliyyəti:Minimum 8 U Bst DNT polimeraza V2 olan 50 μL reaksiyanın 1,6 μg MS2 RNT ilə 37°C-də 16 saat ərzində inkubasiyası müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
5.E. coli DNT:120 U Bst DNT polimeraz V2 E. coli 16S rRNA lokusu üçün spesifik primerlərlə TaqMan qPCR istifadə edərək E. coli genomik DNT-nin varlığı üçün yoxlanılır.E. coli genomik DNT çirklənməsi ≤1 Nüsxədir.
LAMP reaksiyası
| Komponentlər | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Bufer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (hər biri 10 mM) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Yaşıl (25×)a | 1,0 μL |
| Astar qarışığıb | 6 μL |
| Bst DNT Polimerase V2 (Qliserolsuz) (8 U/uL) | 1 μL |
| Şablon | × μL |
| ddH₂O | 25 μL-ə qədər |
Qeydlər:
1) a.SYTOTM 16 Yaşıl (25×): Təcrübə ehtiyaclarına uyğun olaraq digər boyalar əvəzedici kimi istifadə edilə bilər;
2) b.Astar qarışığı: 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2,5 µ M F3, 2,5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB və digər həcmlərin qarışdırılması ilə əldə edilir.
Reaksiya və vəziyyət
1 × HC Bst V2 Bufer, inkubasiya temperaturu 60°C ilə 65°C arasındadır.
İstilik inaktivasiyası
80 °C, 20 dəqiqə
