Rnase A
Ribonukleaza A(RNaseA) molekulyar çəkisi təxminən 13,7 kDa olan 4 disulfid bağından ibarət tək zəncirli polipeptiddir.RNase A, C və U qalıqlarında xüsusi olaraq tək zəncirli RNT-ni parçalayan endoribonukleazdır.Xüsusilə, parçalanma bir nukleotidin 5'-ribozası və bitişik pirimidin nukleotidinin 3'-ribozasındakı fosfat qrupu tərəfindən əmələ gələn fosfodiester bağını tanıyır, beləliklə, 2,3'-Tsiklik fosfatlar müvafiq 3-ə hidrolizə olunur. 'nukleozid fosfatlar (məsələn, pG-pG-pC-pA-pG, pG-pG-pCp və A-PG yaratmaq üçün RNase A tərəfindən parçalanır).RNase A tək zəncirli RNT-nin parçalanmasında ən aktivdir.Tövsiyə olunan iş konsentrasiyası 1-100 μ G/mL-dir, müxtəlif reaksiya sistemlərinə uyğundur.Aşağı duz konsentrasiyası (0-100 mM NaCl) RNT-DNT hibridləşməsi ilə əmələ gələn tək zəncirli RNT, iki zəncirli RNT və RNT zəncirlərini kəsmək üçün istifadə edilə bilər.
Bununla belə, yüksək duz konsentrasiyasında (≥0,3 M) RNase A yalnız xüsusi olaraq tək zəncirli RNT-ni parçalayır.
RNase A ən çox plazmid DNT və ya genomik DNT-nin hazırlanması zamanı RNT-ni çıxarmaq üçün istifadə olunur.Hazırlıq prosesi zamanı DNase aktiv olub-olmaması reaksiyaya asanlıqla təsir edə bilər.Ənənəvi su banyosunda qaynatma üsulu DNaz aktivliyini təsirsiz hala gətirmək üçün istifadə edilə bilər.Bu məhsulda DNaz və proteaz yoxdur və istifadədən əvvəl istilik müalicəsi tələb olunmur.Bundan əlavə, bu məhsul RNaz qoruma analizi və RNT ardıcıllığı analizi kimi molekulyar biologiya təcrübələrində də istifadə edilə bilər.
Saxlama şəraiti
Məhsul 2 il müddətində -25°C~-15°C temperaturda saxlanılmalıdır.
Spesifikasiyalar
| Görünüş | Pudra |
| Kəmiyyət | 100 mq / 1 q |
| Məhsulun növü | RNaz A |
Təlimatlar
Bu, RNase A saxlama məhlulunun hazırlanması üçün ümumi üsullardan biridir.Onu da hazırlamaq olarlaboratoriya və ya istinad ədəbiyyatında ənənəvi üsullara uyğun olaraq digər üsullarla (məsələn10 mM Tris-HCl, pH 7.5 və ya Tris-NaCl məhlulunda birbaşa həll olunur)
1. 10 mg/mL RNase A saxlama məhlulu hazırlamaq üçün 10 mM natrium asetatdan (pH 5.2) istifadə edin.
2. 100 ℃ temperaturda 15 dəqiqə qızdırın.
3. Otaq temperaturuna qədər soyudun, 1/10 həcmində 1 M Tris-HCl (pH 7.4) əlavə edin, pH-nı 7.4-ə tənzimləyin (üçün).məsələn, 500 mL 10 mq/mL RNase saxlama məhlulu 1 M Tris-HCl, pH7.4 əlavə edin).
4. Dondurulmuş saxlama üçün -20 ℃-də alt qablaşdırılır, 2 ilə qədər dayanıqlı ola bilər.
[Qeydlər]:
Neytral şəraitdə RNaseA məhlulunu qaynadarkən RNase çöküntüsü əmələ gələcək;Daha aşağı bir pH-da qaynadın və yağıntı varsa, zülal çirklərinin olması ilə bağlı ola biləcək müşahidə edilə bilər.Qaynadıqdan sonra çöküntü aşkar edilərsə, çirkləri yüksək sürətli sentrifuqalama (13000 rpm) ilə çıxarmaq və sonra dondurmaq üçün alt qablaşdırma etmək olar.
Qeydlər
Zəhmət olmasa, sağlamlığınızı və təhlükəsizliyinizi təmin etmək üçün lazımi şəxsi qoruyucu vasitələrdən, laboratoriya paltarlarından və əlcəklərdən istifadə edin.
