Wild Taq DNT Polimerase
Taq DNT Polimeraz Thermus aquaticus YT-1-dən olan termostabil DNT polimerazasıdır, 5′→3′ polimeraza aktivliyinə və 5′ flap endonükleaza aktivliyinə malikdir.
Komponentlər
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Bufer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNT Polimeraz (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Saxlama Vəziyyəti
0°C altında daşınmalı və -25°C~-15°C temperaturda saxlanılmalıdır.
Vahid Tərifi
Bir vahid 75°C-də 30 dəqiqə ərzində 15 nmol dNTP-ni turşuda həll olunmayan materiala daxil edən fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.
Keyfiyyətə nəzarət
1.Protein Saflığının Təhlili (SDS-PAGE):Taq DNT polimerazasının saflığı SDS-PAGE analizi ilə müəyyən edilmişdir ≥95%.
2.Endonukleaz fəaliyyəti:37 ℃ temperaturda 16 saat ərzində 1 μg λDNA ilə minimum 5 U Taq DNT polimerazı müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
3.Eksonükleaz fəaliyyəti:1 μg λ -Hind Ⅲ həzm DNT ilə minimum 5 U Taq DNT polimerazı 37 ℃ temperaturda 16 saat ərzində müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
4.Nickase Fəaliyyəti:37°C-də 16 saat ərzində 1 μg pBR322 DNT ilə minimum 5 U Taq DNT polimerazı müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
5.RNaz Fəaliyyəti:37°C-də 16 saat ərzində 1,6 μg MS2 RNT ilə minimum 5 U Taq DNT polimerazı müəyyən edildiyi kimi aşkar edilə bilən deqradasiya ilə nəticələnmir.
6.E. coliDNT:5 U Taq DNT polimerazı E. coli 16S rRNA lokusu üçün spesifik primerlərlə TaqMan qPCR istifadə edərək E. coli genomik DNT-nin mövcudluğu üçün yoxlanılır.E. coli genomik DNT çirklənməsi ≤1 Nüsxədir.
7.PCR Gücləndirilməsi (5.0 kb Lambda DNT)- 25 dövr PZR gücləndirilməsi üçün 5 vahid Taq DNT Polimeraz ilə 5 ng Lambda DNT-dən ibarət 50 µL reaksiya gözlənilən 5,0 kb məhsulla nəticələnir.
Reaksiya Quraşdırma
| Komponentlər | Həcmi |
| Şablon DNTa | isteğe bağlıdır |
| 10 μM İrəli Astar | 1 μL |
| 10 μM Ters Astar | 1 μL |
| dNTP Qarışığı (hər biri 10 mM) | 1 μL |
| 10 × Taq Bufer | 5 μL |
| Taq DNT polimerazab | 0,25 μL |
| Nukleazsız su | 50 μL-ə qədər |
Qeydlər:
1) Müxtəlif şablonların optimal reaksiya konsentrasiyası fərqlidir.Aşağıdakı cədvəl 50 µL reaksiya sisteminin tövsiyə olunan şablon istifadəsini göstərir.
| DNT | Məbləğ |
| Genomik | 1 ng-1 μg |
| Plazmid və ya Viral | 1 səh-1 ng |
2) Taq DNT Polimerazın optimal konsentrasiyası xüsusi tətbiqlərdə 0,25 µL~1 µL arasında dəyişə bilər.
ReaksiyaProqram
| addım | Temperatur(°C) | Vaxt | Velosipedlər |
| İlkin denatürasiyaa | 95 ℃ | 5 dəq | - |
| Denatürasiya | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Dövr |
| Qızartmab | 60 ℃ | 15 s | |
| Uzatma | 72 ℃ | 1kb/dəq | |
| Son Uzatma | 72 ℃ | 5 dəq | - |
Qeydlər:
1) İlkin denaturasiya vəziyyəti əksər gücləndirmə reaksiyaları üçün uyğundur və şablon strukturunun mürəkkəbliyinə uyğun olaraq dəyişdirilə bilər.Şablon quruluşu mürəkkəbdirsə, ilkin denaturasiya effektini yaxşılaşdırmaq üçün denaturasiyadan əvvəlki vaxt 5-10 dəqiqəyə qədər uzadıla bilər.
2) Yuvlama temperaturu, ümumiyyətlə, astarın Tm dəyərindən 3~5 ℃ aşağı olan astarın Tm dəyərinə uyğun olaraq tənzimlənməlidir;Mürəkkəb şablonlar üçün effektiv gücləndirmə əldə etmək üçün yumşalma temperaturunu tənzimləmək və uzatma müddətini uzatmaq lazımdır.
