Urasil DNT qlikosilaz
Urasil-DNT Qlikosilaz (UNG və ya UDG) molekulyar çəkisi 25 kDa olan E.coli-nin rekombinant klonudur.O, urasil tərkibli tək və iki zəncirli DNT-dən sərbəst urasilin sərbəst buraxılmasını kataliz edir və RNT-yə qarşı təsirsizdir və PCR gücləndirmə məhsullarının çirklənməsinin qarşısını almaq üçün istifadə edilə bilər.Fəaliyyət prinsipi ona əsaslanır ki, əgər dUTP PCR reaksiyasında dTTP ilə əvəz edilərsə və tərkibində dU əsasları olan PZR gücləndirmə məhsulu əmələ gələrsə, ferment U əsaslarının qlikozid bağını seçici şəkildə bir və iki zəncirli şəkildə poza bilər. DNT və PCR gücləndirmə məhsulunu pisləşdirir.
Tövsiyə olunan tətbiq
Çirklənmənin qarşısının alınmasının gücləndirilməsi
Saxlama Vəziyyəti
Uzunmüddətli saxlama üçün -20°C, istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırılmalıdır, tez-tez donma-ərimədən qaçın.
Saxlama buferi
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizator, 50% Qliserol.
Vahid Tərifi
37°C-də 1 µg tərkibində dU əsasları olan tək zəncirli DNT-ni 1 saat ərzində parçalamaq üçün tələb olunan fermentin miqdarı 1 vahiddir.
Keyfiyyətə nəzarət
1.SDS-PAGE elektroforetik təmizlik 98%-dən çox
2.Gücləndirmə həssaslığı, partiyadan partiyaya nəzarət, sabitlik
3.1U UNG 50 ℃ temperaturda 2 dəqiqə ərzində işləndikdən sonra 103 nüsxədən aşağı U olan şablon tamamilə deqradasiya edilməlidir və heç bir gücləndirici məhsul istehsal oluna bilməz.
4.Ekzogen nukleaz aktivliyi yoxdur
Təlimatlar
| Komponentlər | Həcm (μL) | Son konsentrasiya |
| 10 × PCR Bufer (dNTP pulsuz, Mg²+pulsuz) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP dəyişdirin) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0,25 (0,1-0,5) | 0,25 U (0,1-0,5) |
| 25 × Astar Qarışığıa | 2 | 1× |
| Şablon | - | ＜1μg/reaksiya |
| ddH₂O | 50-yə | - |
Qeyd: a: qPCR/qRT-PCR üçün istifadə edilərsə, flüoresan zond reaksiya sisteminə əlavə edilməlidir.Adətən, 0,2 μM olan son primer konsentrasiyası yaxşı nəticələr verə bilər;reaksiya performansı zəif olduqda, primer konsentrasiyası 0,2-1 μM aralığında tənzimlənə bilər.Adətən, zond konsentrasiyası 0,1-0,3 μM aralığında optimallaşdırılır.Astar və zondun ən yaxşı birləşməsini tapmaq üçün konsentrasiya qradiyenti təcrübələri aparıla bilər.
Qeydlər
1.UNG fermenti çirklənmiş dUTP gücləndirmə məhsullarını PCR gücləndirmə reaksiyasından əvvəl reaksiya sistemindən çıxarmaq, sonra məhsulun çirklənməsi səbəbindən yanlış müsbət nəticələrin qarşısını almaq üçün istifadə edilə bilər.
2.Çirklənmə əleyhinə PCR reaksiyasında istifadə ediləcək UNG fermenti üçün optimal temperatur 2 dəqiqə ərzində ümumiyyətlə 50 ℃-dir;inaktivasiya vəziyyəti 5 dəqiqə ərzində 95 ℃-dir.
3.Tez-tez donma-ərimədən çəkinin və böyük temperatur dalğalanmalarına məruz qalmayın.
4.Gücləndiriləcək müxtəlif genlərin dUTP-dən istifadə effektivliyi və UNG fermentinə həssaslığı fərqlidir, buna görə də UNG sisteminin istifadəsi aşkarlama həssaslığının azalmasına səbəb olarsa, reaksiya sistemi tənzimlənməli və optimallaşdırılmalıdır, əgər texniki dəstəyə ehtiyacınız varsa, əlaqə saxlayın. bizim şirkət.
