Rnase inhibitoru (qliserinsiz)
Fare RNaz inhibitoru E.coli-dən ifadə edilmiş və təmizlənmiş rekombinant siçan RNaz inhibitorudur.Qeyri-kovalent bağlanma yolu ilə 1:1 nisbətində A, B və ya C RNase ilə birləşir və bununla da üç fermentin fəaliyyətini maneə törədir və RNT-ni deqradasiyadan qoruyur.Bununla belə, Aspergillus-dan RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H və ya RNase-ə qarşı təsirli deyil.Sıçan RNaz inhibitoru RT-PCR, RT-qPCR və IVT mRNA ilə sınaqdan keçirilmiş və müxtəlif kommersiya Reverse transkriptazaları, DNT polimerazaları və RNT polimerazaları ilə uyğun olmuşdur.
İnsan RNaz inhibitorları ilə müqayisədə, fare RNase inhibitoru inhibitorun təsirsizləşməsinə səbəb olan oksidləşməyə yüksək həssas olan iki sistein ehtiva etmir.Bu onu aşağı DTT konsentrasiyalarında (1 mM-dən az) sabit edir.Bu xüsusiyyət onu yüksək DTT konsentrasiyalarının reaksiyaya mənfi təsir göstərdiyi reaksiyalarda istifadə üçün münasib edir (məsələn, Real-time RT-PCR).
Aərizə
Bu məhsul RNT deqradasiyasının qarşısını almaq üçün RNaz müdaxiləsinin mümkün olduğu istənilən təcrübədə geniş şəkildə istifadə edilə bilər, məsələn:
1.Birinci zəncir cDNT sintezi, RT-PCR, RT-qPCR və s.;
2.RNT-ni in vitro transkripsiya/tərcümədə deqradasiyadan qoruyun (məsələn, vitro vitroda viral replikasiya);
3.RNT-nin təcrid edilməsi və təmizlənməsi zamanı RNaz aktivliyinin inhibə edilməsi.
Saxlama şərtləri
-25～-15 ℃ temperaturda saxlayın;
Dondurma-ərimə dövrləri ≤ 5 dəfə;
1 il müddətində etibarlıdır.
Vahid tərifi
Bir vahid 5 ng RNaz A-nın aktivliyini 50% maneə törətmək üçün tələb olunan RNaz İnhibitorunun miqdarı kimi müəyyən edilir.
Molekulyar çəki
RNaz inhibitoru (qliserinsiz) 50 kDa zülaldır.
Keyfiyyətə nəzarət
Exonuclease Fəaliyyət:
40 U fermentin 1 μg λ-Hind III həzm DNT ilə 16 saat ərzində 37°C-də inkubasiyası gel elektroforezi ilə müəyyən edilən DNT-nin aşkar edilə bilən deqradasiyası ilə nəticələnmədi.
Endonukleaz fəaliyyəti:
40 U fermentin 1 μg λ DNT ilə 16 saat ərzində 37°C-də inkubasiyası gel elektroforezi ilə müəyyən edilən DNT-nin aşkar edilə bilən deqradasiyası ilə nəticələnmədi.
Nicking Fəaliyyət:
40 U fermentin 1 μg pBR322 ilə 16 saat ərzində 37 ℃ temperaturda inkubasiyası gel elektroforezi ilə müəyyən edilən DNT-nin aşkar edilə bilən deqradasiyası ilə nəticələnmədi.
RNaz Fəaliyyət:
40 U fermentin 1,6 μg MS2 RNT ilə 4 saat ərzində 37 ℃ temperaturda inkubasiyası gel elektroforezi ilə müəyyən edilən RNT-nin aşkar edilə bilən deqradasiyası ilə nəticələnmədi.
E.coli DNT:
40 U ferment TaqMan qPCR tərəfindən aşkar edilir.E.coli DNT-si ≤ 0. 1pg/40U-dur.
Notes
1.Fermentin inaktivasiyasının qarşısını almaq üçün silkələməyin və ya şiddətlə qarışdırmayın.
2.RNase inhibitoru 25℃ ilə 55℃ arasında dəyişən temperaturda aktivdir və ≥65℃-də təsirsizləşir.
3. RNase H, RNase 1 və RNase T1-in fəaliyyəti maneə törədilmir.
4.RNaz fəaliyyətini maneə törətmək üçün pH diapazonu genişdir (pH 5-9-da aktivdir), pH 7-8-də maksimum aktivlik nümayiş etdirir.
