Temperatur Həssas UNG
Temperatur Həssas UNG (TS-UNG) E. coli-də rekombinant ifadə ilə əldə edilir.Ferment urasil tərkibli tək və iki zəncirli DNT-dən sərbəst urasilin sərbəst buraxılmasını kataliz edir və RNT-yə qarşı təsirsizdir.E. coli gen mənşəli adi UNG fermenti ilə müqayisədə TS-UNG fermenti aşağı temperaturda (20℃~37℃) daha yüksək aktivliyə malikdir və temperatura həssasdır və asanlıqla təsirsiz hala salınır (50℃), dUTP tərkibli gücləndirmənin pozulmasının qarşısını alır. məhsulların otaq temperaturunda adi UNG fermentinin təsirsizləşdirilməsindən sonra qala biləcək qalıq aktivliyi ilə.Buna görə də, TS-UNG fermenti yalnız PCR çirklənməsinin qarşısının alınması reaksiyası üçün uyğun deyil, həm də RT-PCR gücləndirmə proqramı ilə yaxşı uyğunlaşır və RT-PCR çirklənməsinin qarşısının alınması reaksiyasında istifadə edilə bilər.
Tövsiyə olunan tətbiq
Çirklənmənin qarşısının alınmasının gücləndirilməsi
Saxlama Vəziyyəti
Uzunmüddətli saxlama üçün -20°C, istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırılmalıdır, tez-tez donma-ərimədən qaçın.
Saxlama buferi
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizator, 50% Qliserin.
Vahid Tərifi
37°C-də 1 µg tərkibində dU əsasları olan tək zəncirli DNT-nin parçalanması üçün tələb olunan fermentin miqdarı 1 vahid aktivlik (U) təşkil edir.
Keyfiyyətə nəzarət
1.SDS-PAGE elektroforetik təmizlik 98%-dən çox
2.Deqradasiya fəaliyyəti, partiyadan partiyaya nəzarət, sabitlik
3.Ekzogen nukleaza fəaliyyəti yoxdur, ekzogen endonükleaz və ya ekzonükleaz çirklənməsi yoxdur.
Təlimatlar
| Komponentlər | Həcm (μL) | Son konsentrasiya |
| 10 × PCR Bufer (dNTP pulsuz, Mg²+pulsuz) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP dəyişdirin) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Astar Qarışığıa | 2 | 1× |
| Şablon | - | ＜1μg/reaksiya |
| ddH₂O | 50-yə | - |
Qeyd: a: qPCR/qRT-PCR üçün istifadə edilərsə, flüoresan zond reaksiya sisteminə əlavə edilməlidir.Adətən, 0,2 μM olan son primer konsentrasiyası yaxşı nəticələr verə bilər;reaksiya performansı zəif olduqda, primer konsentrasiyası 0,2-1 μM aralığında tənzimlənə bilər.Adətən, zond konsentrasiyası 0,1-0,3 μM aralığında optimallaşdırılır.Astar və zondun ən yaxşı birləşməsini tapmaq üçün konsentrasiya qradiyenti təcrübələri aparıla bilər.
Qeydlər
1.TS-UNG fermentinin optimal reaksiya temperaturu nisbətən aşağıdır və o, 20℃~37℃ aralığında optimallaşdırıla bilər, fermentin dozası və reaksiya müddəti 0,1~0,5 U, 5~ aralığında optimallaşdırıla bilər. 10 dəq;və ferment tərs transkripsiya prosesində təsirsiz hala gələ bilər.
2.Çirklənmənin qarşısını almaq üçün PCR və RT-PCR üçün uyğundur.
3.Tez-tez donma-ərimədən çəkinin və böyük temperatur dalğalanmalarına məruz qalmayın.
4.Gücləndiriləcək müxtəlif genlərin dUTP-dən istifadə effektivliyi və UNG fermentinə həssaslığı fərqlidir, buna görə də UNG sisteminin istifadəsi aşkarlama həssaslığının azalmasına səbəb olarsa, reaksiya sistemi tənzimlənməli və optimallaşdırılmalıdır, əgər texniki dəstəyə ehtiyacınız varsa, əlaqə saxlayın. bizim şirkət.
