Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Mavi)

Pişik nömrəsi: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Boya Əsaslı) yüksək həssaslıq və spesifiklik ilə xarakterizə olunan 2 × real vaxt kəmiyyət PCR gücləndirilməsi üçün ilkin məhluldur, mavi rəngdədir və nümunə əlavəsinin izlənməsi effektinə malikdir.Əsas komponent Taq DNT polimerazı nümunənin hazırlanması zamanı primerin yumşaldılması səbəbindən qeyri-spesifik gücləndirməni effektiv şəkildə maneə törətmək üçün antikorların isti başlanğıcından istifadə edir.Eyni zamanda, formula PCR reaksiyasının gücləndirilməsinin effektivliyini yaxşılaşdırmaq və müxtəlif GC məzmunlu genlərin gücləndirilməsini bərabərləşdirmək (30 ~ 70%) üçün təşviqedici amilləri əlavə edir ki, kəmiyyət PCR geniş kəmiyyətdə yaxşı xətti əlaqə əldə edə bilsin. bölgə.Bu məhsulda əksər qPCR alətlərinə aid olan xüsusi ROX Passive Reference Dye var.Müxtəlif alətlərdə ROX konsentrasiyasını tənzimləmək lazım deyil.Reaksiya sistemini gücləndirməyə hazırlamaq üçün yalnız primerlər və şablonlar əlavə etmək lazımdır.

Komponentlər

Universal Mavi qPCR Master Mix

Saxlama şəraiti

Məhsul buz paketləri ilə göndərilir və -25℃~-15℃ temperaturda 18 ay saxlanıla bilər.Reaksiya sistemini saxlayarkən və ya hazırlayarkən güclü işıq şüalanmasının qarşısını almaq lazımdır.

Spesifikasiya

Təlimatlar

1.Reaksiya sistemi

[Qeyd]: Güclü silkələnmədən həddindən artıq baloncukların yaranmasının qarşısını almaq üçün istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırın.

a) Primer konsentrasiyası: Son primer konsentrasiyası 0,2μmol/L-dir və həmçinin müvafiq olaraq 0,1 və 1,0μmol/L arasında tənzimlənə bilər.

b) Şablon konsentrasiyası: Şablon seyreltilməmiş cDNA ehtiyat məhluludursa, istifadə olunan həcm qPCR reaksiyasının ümumi həcminin 1/10-dan çox olmamalıdır.

c) Şablon seyreltmə: cDNA ehtiyat məhlulunu 5-10 dəfə seyreltmək tövsiyə olunur.Əlavə edilmiş şablonun optimal miqdarı gücləndirmə ilə əldə edilən Ct dəyəri 20-30 dövr olduqda daha yaxşıdır.

d) Reaksiya sistemi: Hədəf gen gücləndirilməsinin effektivliyini və təkrarlanmasını təmin etmək üçün 20μL və ya 50μL istifadə etmək tövsiyə olunur.

e) Sistemin hazırlanması: Zəhmət olmasa, super təmiz skamyada hazırlayın və ucları və reaksiya borularını nukleaz qalıqları olmadan istifadə edin;uclarından filtr kartricləri ilə istifadə etmək tövsiyə olunur.Çarpaz çirklənmədən və aerozolla çirklənmədən çəkinin.

2.Reaksiya proqramı

Standart proqram

Sürətli proqram

[Qeyd]: Sürətli proqram genlərin böyük əksəriyyəti üçün uyğundur və standart proqramlar fərdi mürəkkəb ikinci dərəcəli struktur genləri üçün sınaqdan keçirilə bilər.

a) Qızdırma temperaturu və vaxtı: Lütfən, primer və hədəf genin uzunluğuna uyğun olaraq tənzimləyin.

b) Floresensiya siqnalının alınması (★): Zəhmət olmasa, eksperimental proseduru alətin istifadəsi üçün təlimatlardakı tələblərə uyğun təyin edin.

c) Ərimə əyrisi: Alətin standart proqramı normal şəkildə istifadə edilə bilər.

3. Nəticələrin Təhlili 

Kəmiyyət təcrübələri üçün minimum üç bioloji təkrar tələb olunurdu.Reaksiyadan sonra gücləndirmə əyrisi və ərimə əyrisi təsdiqlənməlidir.

3.1 Gücləndirmə əyrisi:

Standart gücləndirmə əyrisi S şəklindədir.Kəmiyyət təhlili Ct dəyəri 20 ilə 30 arasında olduqda daha dəqiq olur. Əgər Ct dəyəri 10-dan azdırsa, şablonu seyreltmək və testi yenidən aparmaq lazımdır.Ct dəyəri 30-35 arasında olduqda, gücləndirmə səmərəliliyini artırmaq və nəticə təhlilinin düzgünlüyünü təmin etmək üçün şablon konsentrasiyasını və ya reaksiya sisteminin həcmini artırmaq lazımdır.Ct dəyəri 35-dən çox olduqda, test nəticələri genin ifadəsini kəmiyyətcə təhlil edə bilməz, lakin keyfiyyət analizi üçün istifadə edilə bilər.

3.2 Ərimə əyrisi:

Ərimə əyrisinin tək zirvəsi reaksiyanın spesifikliyinin yaxşı olduğunu və kəmiyyət təhlilinin aparıla biləcəyini göstərir;ərimə əyrisi ikiqat və ya çoxlu pikləri göstərirsə, kəmiyyət təhlili aparıla bilməz.Ərimə əyrisi ikiqat zirvələri göstərir və qeyri-hədəf zirvənin primer dimer və ya DNT agarose gel elektroforezi ilə qeyri-spesifik gücləndirmə olduğunu mühakimə etmək lazımdır.Bir primer dimerdirsə, primer konsentrasiyasını azaltmaq və ya yüksək gücləndirmə səmərəliliyi ilə primerləri yenidən dizayn etmək tövsiyə olunur.Bu qeyri-spesifik gücləndirmədirsə, lütfən, yumşalma temperaturunu artırın və ya primerləri spesifikliklə yenidən dizayn edin.

Qeydlər

Zəhmət olmasa, sağlamlığınızı və təhlükəsizliyinizi təmin etmək üçün lazımi şəxsi qoruyucu vasitələrdən, laboratoriya paltarlarından və əlcəklərdən istifadə edin!

Bu məhsul YALNIZ tədqiqat üçün istifadə olunur!