UDG/UNG fermentləri
UDG (urasil DNT qlikosilaz) ssDNA və dsDNA-da urasil bazası ilə şəkər-fosfat onurğası arasında N-qlikozidik əlaqənin hidrolizini kataliz edə bilər.O, aerozol çirklənməsini asanlıqla idarə edə bilir və PCR, qPCR, RT-qPCR və LAMP kimi ümumi molekulyar biologiya sistemləri üçün uyğundur.
Spesifikasiyalar
| İfadə Hostu | Urasil DNT qlikosilaz geni ilə rekombinant E. coli |
| Molekulyar çəki | 24. 8kDa |
| Saflıq | ≥95% (SDS-PAGE) |
| İstilik inaktivasiyası | 95℃, 5~10 dəq |
| Vahid Tərifi | Bir vahid (U) 25 ℃ temperaturda 30 dəqiqə ərzində l μg dU tərkibli dsDNA-nın hidrolizini kataliz etmək üçün tələb olunan fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir. |
Saxlama
Məhsul iki il ərzində -25°C~-15°C temperaturda saxlanılmalıdır.
Təlimatlar
1.Aşağıdakı sistemə uyğun olaraq PCR reaksiya qarışığının hazırlanması
| Komponentlər | Həcm (μL) | Son konsentrasiya |
| 10×PCR Bufer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/Süzülmə) | 1 | 0,2 mmol/Süzülmə |
| Şablon DNT | X | - |
| Primer 1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNT Polimeraz (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Urasil DNT Qlikosilaz (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | 50-yə qədər | - |
Qeyd: Eksperimental tələblərə uyğun olaraq, dUTP-nin son konsentrasiyası 0,2-0,6 mmol/L arasında tənzimlənə bilər və seçici olaraq 0,2 mmol/L dTTP əlavə edilə bilər.
2.Gücləndirmə proseduru
| Velosiped addımı | Temperatur | Vaxt | Velosipedlər |
| dU tərkibli şablonun deqradasiyası | 25℃ | 10 dəq | 1 |
| UDG aktivasiyası, şablonun ilkin denatürasiyası | 95℃ | 5 ~ 10 dəqiqə | 1 |
| Denatürasiya | 95℃ | 10 san |
30-35 |
| Qızartma | 60℃ | 20 san | |
| Uzatma | 72℃ | 30san/kb | |
| Son uzadılma | 72℃ | 5 dəq | 1 |
Qeyd: 25°C-də reaksiya müddəti eksperimental tələblərə uyğun olaraq 5-10 dəqiqə ərzində tənzimlənə bilər.
Qeydlər
1.UDG əksər PCR reaksiya tamponlarında aktivdir.
2.Fermentlər istifadə edildikdə buz qutusunda və ya buz banyosunda saxlanmalı və istifadədən dərhal sonra -20°C temperaturda saxlanmalıdır.
3.Zəhmət olmasa, sağlamlığınızı və təhlükəsizliyinizi təmin etmək üçün lazımi şəxsi qoruyucu vasitələrdən, laboratoriya paltarlarından və əlcəklərdən istifadə edin!
