Hotstart Taq DNT Polimerase
Hot Start Taq DNT Polimerase (Antikor modifikasiyası) Thermus aquaticus YT-1-dən 5'→3' polimeraza aktivliyinə və 5' flap endonükleaza aktivliyinə malik olan isti başlanğıc termostabil DNT polimerazıdır.İsti başlanğıc Taq DNT polimerazı termolabil Taq antikorları ilə dəyişdirilmiş Taq DNT polimerazıdır.Antikor modifikasiyası PCR-in spesifikliyini, həssaslığını və məhsuldarlığını artırdı.
Komponentlər
| Komponent | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq Bufer | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNT Polimerase (Antikism dəyişdirilmiş) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Tətbiqlər
10 mM Tris-HCl (25 ° C-də pH 7.4), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM ditiotreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 və 50% Gliserol.
Saxlama Vəziyyəti
0°C altında daşınmalı və -25°C~-15°C temperaturda saxlanılmalıdır.
Vahid Tərifi
Bir vahid 75°C-də 30 dəqiqə ərzində 15 nmol dNTP-ni turşuda həll olunmayan materiala daxil edən fermentin miqdarı kimi müəyyən edilir.
Keyfiyyətə nəzarət
1.Endonukleaz fəaliyyəti:20 U fermentin 4 μg pUC19 DNT ilə 4 saat ərzində 37 ℃ temperaturda inkubasiyası gel elektroforezi ilə müəyyən edilən DNT-nin aşkar edilə bilən deqradasiyası ilə nəticələnmədi.
2.5 kb Lambda PCR:200 µM dNTP və 0,2 µM primerlərin iştirakı ilə 1,25 vahid Taq DNT Polimeraz ilə 5 ng Lambda DNT-nin PCR gücləndirilməsinin 25 dövrü gözlənilən 5 kb məhsulla nəticələnir.
3.Eksonükleaz fəaliyyəti:10 nmol 5´-FAM oliqonukleotid ilə minimum 12,5 U Taq DNT Polimeraz ehtiva edən 50 µl reaksiyanın 37 ℃ temperaturda 30 dəqiqə inkubasiyası aşkar edilə bilən deqradasiya vermir.
4.RNaz Fəaliyyəti:Tərkibində 20 U ferment olan 10 µL reaksiyanın 1 μg RNT transkripti ilə 2 saat ərzində 37°C-də inkubasiyası, gel elektroforezi ilə müəyyən edilən RNT-nin aşkar edilə bilən deqradasiyası ilə nəticələnmədi.
5.İstilik inaktivasiyası:Yox.
Reaksiya sistemi
| Komponentlər | Həcmi |
| Şablon DNTa | isteğe bağlıdır |
| 10 μM İrəli Astar | 0,5 μL |
| 10 μM Ters Astar | 0,5 μL |
| dNTP Qarışığı (hər biri 10 mM) | 0,5 μL |
| 5 × HC Taq Bufer | 5 μL |
| Taq DNT polimerazab(5U/μL) | 0,125 μL |
| Nukleazsız su | 25 μL-ə qədər |
Qeydlər:
1) a.
| DNT | Məbləğ |
| Genomik | 1 ng-1 μg |
| Plazmid və ya Viral | 1 səh-1 ng |
2) b.Taq DNT Polimerazın optimal konsentrasiyası xüsusi tətbiqlərdə 5-50 vahid/ml (0,1-0,5 vahid/25 µL reaksiya) arasında dəyişə bilər.
Termal velosiped protokolu
PCR
| addım | Temperatur(°C) | Vaxt | Velosipedlər |
| İlkin denatürasiyaa | 95 ℃ | 1-3 dəq | - |
| Denatürasiya | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Dövr |
| Qızartmab | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Uzatma | 68 ℃ | 1kb/dəq | |
| Son Uzatma | 68 ℃ | 5 dəq | - |
Qeydlər:
1) 95°C-də 1 dəqiqəlik ilkin denaturasiya əksər gücləndirmələr üçün kifayətdir.Çətin şablonlar üçün 95°C-də 2-3 dəqiqə daha uzun denaturasiya tövsiyə olunur.Koloniya PZR ilə 95°C-də ilkin 5 dəqiqəlik denaturasiya tövsiyə olunur.
2) Yuvlama mərhələsi adətən 15-60 s-dir.Yuyulma temperaturu primer cütünün Tm-ə əsaslanır və adətən 45-68 ℃-dir.
